Otwarty dostęp

Mutacja odpowiedzialna za dystonię torsyjną typu 1 wykazuje zdolność stymulacji wewnątrzkomórkowej agregacji zmutowanej huntingtyny

Marta Jurek
Marta Jurek
, 
Ewa Obersztyn
Ewa Obersztyn
 oraz 
Michał Milewski
Michał Milewski
   | 12 kwi 2018
Journal of Mother and Child's Cover Image
O artykule
Poprzedni artykuł
Następny artykuł
Zacytuj
Data publikacji: 12 kwi 2018
Zakres stron: 33 - 38
Otrzymano: 19 gru 2017
Przyjęty: 09 sty 2018
DOI: https://doi.org/10.34763/devperiodmed.20182201.3338
© 2018 Marta Jurek, Ewa Obersztyn, Michał Milewski, published by Sciendo
This work is licensed under the Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Fig. 1

Fluorescence microscopy analysis of cells co-expressing different variants of TOR1A and mutant huntingtin. Exemplary HT-22 (A) and HeLa (B) cells expressing wild-type (WT) or mutated (ΔE302/303) torsin 1A fused with GFP (GFP-TOR1A) and the c-Myc-tagged N-terminal 64 amino-acid fragment of huntingtin containing the pathogenically elongated polyQ tract (HTT M64-Q146). Since huntingtin was stained red with anti-c-Myc antibodies, huntingtin aggregates are seen as red inclusion bodies, usually located in the perinuclear region. The green signal corresponds to GFP-TOR1A, with WT torsin 1A showing mostly reticular staining associated with endoplasmic reticulum, while the mutant protein (ΔE302/303) accumulates in intracellular bodies that are apparently distinct from huntingtin aggregates. The nuclei were stained blue with DAPI. Scale bar - 10 μm.Ryc. 1. Mikroskopowa analiza fluorescencyjna komórek koeksprymujących różne warianty białka TOR1A i zmutowanej huntingtyny. Przykładowe komórki HT-22 (A) i HeLa (B) eksprymujące prawidłową (WT) lub zmutowaną (ΔE302/303) torsynę 1A w fuzji z GFP (GFP-TOR1A) oraz N-końcowy fragment huntingtyny o długości 64 aminokwasów wyznakowany epitopem c-Myc i zawierający patogennie wydłużony ciąg poli-Q (HTT M64-Q146). Ponieważ huntingtynę wybarwiono na czerwono przy użyciu przeciwciał anty-c-Myc, agregaty huntingtynowe widoczne są jako czerwone ciała inkluzyjne, zazwyczaj zlokalizowane w pobliżu jądra komórkowego. Sygnał zielony odpowiada białku fuzyjnemu GFP-TOR1A, przy czym prawidłowa torsyna 1A (WT) wykazuje retikularny wzór lokalizacji charakterystyczny dla siateczki śródplazmatycznej, natomiast zmutowany wariant białka (ΔE302/303) akumuluje się w wewnątrzkomórkowych skupiskach, odmiennych od agregatów huntingtynowych. Jądra komórkowe wybarwione zostały na niebiesko przy użyciu DAPI. Skala liniowa − 10 μm.
Fluorescence microscopy analysis of cells co-expressing different variants of TOR1A and mutant huntingtin. Exemplary HT-22 (A) and HeLa (B) cells expressing wild-type (WT) or mutated (ΔE302/303) torsin 1A fused with GFP (GFP-TOR1A) and the c-Myc-tagged N-terminal 64 amino-acid fragment of huntingtin containing the pathogenically elongated polyQ tract (HTT M64-Q146). Since huntingtin was stained red with anti-c-Myc antibodies, huntingtin aggregates are seen as red inclusion bodies, usually located in the perinuclear region. The green signal corresponds to GFP-TOR1A, with WT torsin 1A showing mostly reticular staining associated with endoplasmic reticulum, while the mutant protein (ΔE302/303) accumulates in intracellular bodies that are apparently distinct from huntingtin aggregates. The nuclei were stained blue with DAPI. Scale bar - 10 μm.Ryc. 1. Mikroskopowa analiza fluorescencyjna komórek koeksprymujących różne warianty białka TOR1A i zmutowanej huntingtyny. Przykładowe komórki HT-22 (A) i HeLa (B) eksprymujące prawidłową (WT) lub zmutowaną (ΔE302/303) torsynę 1A w fuzji z GFP (GFP-TOR1A) oraz N-końcowy fragment huntingtyny o długości 64 aminokwasów wyznakowany epitopem c-Myc i zawierający patogennie wydłużony ciąg poli-Q (HTT M64-Q146). Ponieważ huntingtynę wybarwiono na czerwono przy użyciu przeciwciał anty-c-Myc, agregaty huntingtynowe widoczne są jako czerwone ciała inkluzyjne, zazwyczaj zlokalizowane w pobliżu jądra komórkowego. Sygnał zielony odpowiada białku fuzyjnemu GFP-TOR1A, przy czym prawidłowa torsyna 1A (WT) wykazuje retikularny wzór lokalizacji charakterystyczny dla siateczki śródplazmatycznej, natomiast zmutowany wariant białka (ΔE302/303) akumuluje się w wewnątrzkomórkowych skupiskach, odmiennych od agregatów huntingtynowych. Jądra komórkowe wybarwione zostały na niebiesko przy użyciu DAPI. Skala liniowa − 10 μm.

Fig. 2

Percentage of transfected cells showing huntingtin aggregation in the presence of over-expressed torsin 1A. The diagrams show the level of huntingtin aggregation in HT-22 (A) or HeLa (B) cells co-transfected with plasmids encoding mutant huntingtin N-terminal fragments of different length (588, 171 or 64 amino acids of the reference sequence) and either torsin 1A (wild-type or mutated protein) or an empty vector (pRK5). Asterisks indicate statistically significant differences in relation to cells over-expressing the same variant of huntingtin in the absence of torsin 1A.Ryc. 2. Procentowy udział transfekowanych komórek wykazujących agregację huntingtyny w obecności nadeksprymowanej torsyny 1A. Diagramy przedstawiają poziom agregacji huntingtyny w komórkach HT-22 (A) lub HeLa (B) kotransfekowanych plazmidem kodującym N-końcowy fragment zmutowanej huntingtyny o określonej długości (588, 171 lub 64 aminokwasy sekwencji referencyjnej) oraz plazmid kodujący torsynę 1A (prawidłową lub zmutowaną) lub pusty wektor plazmidowy (pRK5). Gwiazdkami oznaczono wartości różniące się znacząco od wartości odpowiadających komórkom nadeksprymujacym ten sam wariant huntingtyny przy braku obecności torsyny 1A.
Percentage of transfected cells showing huntingtin aggregation in the presence of over-expressed torsin 1A. The diagrams show the level of huntingtin aggregation in HT-22 (A) or HeLa (B) cells co-transfected with plasmids encoding mutant huntingtin N-terminal fragments of different length (588, 171 or 64 amino acids of the reference sequence) and either torsin 1A (wild-type or mutated protein) or an empty vector (pRK5). Asterisks indicate statistically significant differences in relation to cells over-expressing the same variant of huntingtin in the absence of torsin 1A.Ryc. 2. Procentowy udział transfekowanych komórek wykazujących agregację huntingtyny w obecności nadeksprymowanej torsyny 1A. Diagramy przedstawiają poziom agregacji huntingtyny w komórkach HT-22 (A) lub HeLa (B) kotransfekowanych plazmidem kodującym N-końcowy fragment zmutowanej huntingtyny o określonej długości (588, 171 lub 64 aminokwasy sekwencji referencyjnej) oraz plazmid kodujący torsynę 1A (prawidłową lub zmutowaną) lub pusty wektor plazmidowy (pRK5). Gwiazdkami oznaczono wartości różniące się znacząco od wartości odpowiadających komórkom nadeksprymujacym ten sam wariant huntingtyny przy braku obecności torsyny 1A.
eISSN:
2719-535X
Język:
Angielski
Częstotliwość wydawania:
Volume Open
Dziedziny czasopisma:
Medicine, Clinical Medicine, Pediatrics and Juvenile Medicine, Paediatric Haematology and Oncology, Public Health
Kanał RSS czasopisma