Logowanie
Zarejestruj się
Zresetuj hasło
Publikuj i Dystrybuuj
Rozwiązania Wydawnicze
Rozwiązania Dystrybucyjne
Dziedziny
Architektura i projektowanie
Bibliotekoznawstwo i bibliologia
Biznes i ekonomia
Chemia
Chemia przemysłowa
Filozofia
Fizyka
Historia
Informatyka
Inżynieria
Inżynieria materiałowa
Językoznawstwo i semiotyka
Kulturoznawstwo
Literatura
Matematyka
Medycyna
Muzyka
Nauki farmaceutyczne
Nauki klasyczne i starożytne studia bliskowschodnie
Nauki o Ziemi
Nauki o organizmach żywych
Nauki społeczne
Prawo
Sport i rekreacja
Studia judaistyczne
Sztuka
Teologia i religia
Zagadnienia ogólne
Publikacje
Czasopisma
Książki
Materiały konferencyjne
Wydawcy
Blog
Kontakt
Wyszukiwanie
EUR
USD
GBP
Polski
English
Deutsch
Polski
Español
Français
Italiano
Koszyk
Home
Czasopisma
Journal of Veterinary Research
Tom 64 (2020): Zeszyt 2 (June 2020)
Otwarty dostęp
A novel, rapid, and simple PMA-qPCR method for detection and counting of viable
Brucella
organisms
Shi-Jun Zhang
Shi-Jun Zhang
,
Lu-Lu Wang
Lu-Lu Wang
,
Shi-Ying Lu
Shi-Ying Lu
,
Pan Hu
Pan Hu
,
Yan-Song Li
Yan-Song Li
,
Ying Zhang
Ying Zhang
,
Heng-Zhen Chang
Heng-Zhen Chang
,
Fei-Fei Zhai
Fei-Fei Zhai
,
Zeng-Shan Liu
Zeng-Shan Liu
,
Zhao-Hui Li
Zhao-Hui Li
oraz
Hong-Lin Ren
Hong-Lin Ren
| 12 maj 2020
Journal of Veterinary Research
Tom 64 (2020): Zeszyt 2 (June 2020)
O artykule
Poprzedni artykuł
Następny artykuł
Abstrakt
Artykuł
Ilustracje i tabele
Referencje
Autorzy
Artykuły w tym zeszycie
Podgląd
PDF
Zacytuj
Udostępnij
Data publikacji:
12 maj 2020
Zakres stron:
253 - 261
Otrzymano:
19 wrz 2019
Przyjęty:
28 kwi 2020
DOI:
https://doi.org/10.2478/jvetres-2020-0033
Słowa kluczowe
viable bacteria
,
gene
,
propidium monoazide
,
quantitative PCR
© 2020 S.J. Zhang et al. published by Sciendo
This work is licensed under the Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 3.0 License.
Fig. 1
The target BCSP31 fragment of PCR amplification from Brucella suis S2 strain. M – DL2000 DNA Marker (TaKaRa Bio); lane 1 – DNA fragment of PCR amplification
Fig. 2
The standard curve for calculating Brucella concentration according to CT of qPCR based on the template of recombinant standard plasmid pMD-18T-BCSP31
Fig. 3
Optimisation of PMA treatment conditions. A – Effect of different exposure time on qPCR amplification; B – Different concentrations of PMA treating dead bacteria; C – Different concentrations of PMA treating viable bacteria; * – P < 0.05; Yellow columns – optimal PMA treatment time of 10 min; Yellow columns with ☆ – optimal PMA treatment concentration of 15 μg/mL; × – not detected
Fig. 4
The sensitivity of detecting B. suis S2 strain. A – sensitivity by the PMA-qPCR; B – sensitivity by the conventional PCR, comprising M – DL2000 DNA Marker; lanes 1–10 – 108 – 10-1 CFU/mL
Fig. 5
Analysis of the specificity of PMA-qPCR. A – amplification plot; B – melting curves of the qPCR amplification product; C – agarose gel electrophoresis of different Brucella species detected by the normal PCR, comprising M – DL5000 DNA Marker; lane 1 – B. suis S2; lane 2 – B. abortus 2308; lane 3 – B. abortus A19; lane 4 – B. melitensis M5; lane 5 – B. melitensis 16M; and lane 6 – B. ovis; D – agarose gel electrophoresis of species other than Brucella amplified by the conventional PCR, comprising M – DL2000 DNA Marker; lane 1 – B. suis S2; lane 2 – E. coli; lane 3 – S. typhimurium; lane 4 – Y. enterocolitica; lane 5 – V. parahaemolyticus; and lane 6 – RNase-free water
Fig. 6
Analysis of different ratios of viable to dead B. suis S2 strain using the PMA-qPCR method and the qPCR method. * – P < 0.05
Fig. 7
Determination of the amount of the viable B. suis S2 strain by PMA-qPCR and plate counting methods. Pure bacterial liquid – B. suis cultured in TSB; A – B. suis harbouring in mouse macrophage RAW 264.7 cells infected with 1.28 × 1012 CFU/mL of B. suis S2 strain; B – B. suis harbouring in mouse macrophage RAW 264.7 cells infected with 0.64 × 1012 CFU/mL of B. suis S2 strain; * P < 0.05
Coefficient of variation for intra- and inter-batch experiments
DNA dilution times
Intra-assay
Inter-assay
Average value of CT
SD
CV
Average value of CT
SD
CV
10
7
17.55277
0.13205
0.75
17.95203
0.26862
1.50
10
6
21.9137
0.26965
1.23
22.35123
0.45614
2.04
10
5
23.80697
0.15085
0.63
23.82857
0.43607
1.83
Podgląd