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The EuroBiotech Journal
Édition 4 (2020): Edition 4 (October 2020)
Accès libre
Optimization of Lyophilized LAMP and RT-PCR Reaction Mixes for Detection of Tuberculosis
Esra Agel
Esra Agel
et
Hasan Sagcan
Hasan Sagcan
| 21 oct. 2020
The EuroBiotech Journal
Édition 4 (2020): Edition 4 (October 2020)
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Article Category:
Research Article
Publié en ligne:
21 oct. 2020
Pages:
230 - 236
DOI:
https://doi.org/10.2478/ebtj-2020-0027
Mots clés
Lyophilized master mix
,
Loop-mediated isothermal amplification
,
LAMP
,
Real-time PCR
,
© 2020 Esra Agel, Hasan Sagcan, published by Sciendo
This work is licensed under the Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.
Figure 1
Results of different cryoprelyophilized mixture. 1) Freshly prepared mixture, 2) (0.5 % PEG 8000 + 2.0 % stachyose) Cryoprotectant mixture, 3) (0.5 % PEG 8000 + 1.0 % stachyose) Cryoprotectant mixture.
Figure 2
Results of lyophilized RT-PCR (a) and lyophilized LAMP (b) mixture. a: only 3. cryoprotectant mixture has positive result in RT-PCR assay. b: Results of LAMP assay 1) DNA ladder (100 bp, NEB), 2) 1. Cryoprotectant mixture, 3) 2. Cryoprotectant mixture, 4) 3. Cryoprotectant mixture 5) Freshly prepared mixture.
Figure 3
RT-PCR results of thermal stability of lyophilized mixtures
Figure 4
Detection limit results of lyophilized RT-PCR (a) and LAMP (b). a: 1) 105 CFU/ml, 2) 104 CFU/ml, 3) 103 CFU/ml, 4) 102 CFU/ml, 5) 101 CFU/ml, 6) negative control. b: a: 1) 105 CFU/ml, 2) 104 CFU/ml, 3) 103 CFU/ml, 4) 102 CFU/ml, 5) 101 CFU/ml, 6) negative control
Figure 5
An image of lyophilized mixture in PCR tubes.
Cryoprotectant mixtures and amount of ingredients
The protocol of freeze dryer